一、概念

利用混和物中各組分理化性質（吸附力、分子形狀、大小、分子極性、分子親和力以及分配系數）的差異，在物質經過兩相中進行分離的一種技術。

本世紀初（1903年），俄國植物學家M.C.Jber發現并使用這一技術證明了植物的葉子中不僅有葉綠素，還含其他色素，實際上他使用的吸附層析。現在層系法已成為生化、分子生物學及其它學科領域有效的分離、分析工具之一。

二、原理

具體過程：可分離物質：糖類、有機酸、氨基酸、核苷酸。

三、分類

1.  按兩相所處物理狀態分類

氣相層析：氣液層析（固定相為液體）和氣固層析（固定相為固體），流動相為氣體。

液相層析：液液層析（固定相為液體）和液固層析（固定相為固體），流動相為液體。

2.  按層析方式分類

柱層析：固定相裝于柱內，使樣品沿著一個方向移動而分離。

薄層層析：將適當粘度的固定相均勻鋪在薄板上，點樣后，用流動相展開。

紙層析：用濾紙作液體的載體，點樣后用流動相展開。

3.  根據層析原理分類：常用分類法

（1）吸附層析：固定相是固體吸附劑，通過對不同溶質吸附力強弱不同進行分離。

（2）分配層析：利用兩相中的分配系數不同。

 分配系數：當一種溶質在兩種給定的互不相溶的溶劑中分配時，在一定溫度下達到平衡后，溶質在兩相中的濃度比值為一常數，即分配系數（Kd）

  Kd＝Ca / Cb

Ca和Cb分別代表某一物質在互不相溶的兩相，A相（動相）和B相（靜相）中的濃度。

（3）離子交換層析：固定相是離子交換劑，各組分與其親和力不同

（4）凝膠層析：固定相是多孔凝膠，根據流動相中溶質的分子量大小差異進行分離

（5）親和層析：利用固定相載體表面偶聯具有特殊親和作用的配基，與溶質分子發生可逆的特異性結合進行分離

（6）金屬螯合層析

（7）疏水層析

（8）反相層析

四、凝膠層析（又叫凝膠過濾或分子篩）

凝膠層析是指混和物隨流動相流經固定相的層析柱時，混合物中各組分按其分子大小不同而被分類的技術。

1.  原理

凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網狀結構的物質，凝膠的每個顆粒內部都具有很多細微的小孔，如同篩子一樣。常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。

葡聚糖凝膠介質是由多聚葡聚糖與環氧綠丙烷交連而成。最常用的葡聚糖凝膠層析介質是Sephadex G系列，不同型號的凝膠用G表示，G代表交聯度，從G10到G100。“G”后面的數字表示每10g干膠的吸水量，可根據待分離混和物分子量大小選用不同“G”值的凝膠。

2.  分離過程：

樣品隨洗脫液的流動下移

3.  影響凝膠柱層析的主要因素

（1）層析柱的選擇與裝填

 層析柱的大小應根據分離樣品量的多少及對分辨率的要求而定。凝膠柱填裝后用肉眼觀察應均勻、無紋路、無汽泡。

（2）流動相――洗脫液的選擇：是含有一定濃度鹽的緩沖液，目的是為了防止凝膠可能有吸附作用。其選擇主要取決于待分離樣品，一般來說只要能溶解洗脫物質，并不使其變性的緩沖液都可用于凝膠層析。

（3）加樣量：加樣量的多少應根據具體的實驗而定：一般分級分離時加樣量約為凝膠柱床體積的1％－5％，而分組分離時加樣量約為凝膠柱床體積的10%-25%.

（4）凝膠再生：葡聚糖凝膠再生使用NaOH（0.2M）和NaCl(0.5M)混合液處理。

五、離子交換層析

離子交換層析是利用固定相偶聯的離子交換基團和流動相解離的離子化合物之間發生可逆的離子交換反應而進行的分離方法。

1.  原理

離子交換交換層析是利用離子交換劑對各種離子的親和力不同，借以分離混和物中各種離子的一種技術。其主要特點是依靠帶有相反電荷的顆粒之間的吸引力的作用。

離子交換層析的固定相是載有大量電荷的離子交換劑，流動相是具有一定pH值和一定離子強度的電解質溶液。

離子交換劑按其所帶電荷性質，分為：

陰離子交換劑帶正電荷，與混合物中帶負電的組分結合 陰離子交換層析。

陽離子交換劑 帶負電荷，與混合物中帶正電的組分結合 陽離子交換層析。

常用離子交換劑有：離子交換樹脂，離子交換纖維素等