《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》意見征求
作者： 2020年04月14日 來源：全球化工設備網 瀏覽量：
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為此，中國測試技術研究院、正能生物、中國測試技術研究院生物研究所、青島科技大學等單位在國家標準化管理委員會的主管下，起草編制了《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》。日前，該標準已經編制完成，如今正面向社會征
有研究表明，肌動蛋白可以進入循環系統如血液、腦脊液及其他生物體液，如淋巴液、尿液、支氣管肺泡灌洗液中，不僅可以作為細胞損傷的標志物,而且可能有直接的致死效應。而F-肌動蛋白可作為一種自身抗原，參與自身免疫性疾病的發生發展，疾病相關抗肌動蛋白抗體也可作為多種疾病的預后生物標志物，為疾病診斷提供可信賴的依據。
進一步研究肌動蛋白在細胞外的存在形式及其在生理與病理反應過程中的作用，不僅僅對基礎醫學，更是對許多重大疾病的診斷、預防及治療有重要意義。為此，中國測試技術研究院、正能生物、中國測試技術研究院生物研究所、青島科技大學等單位在國家標準化管理委員會的主管下，起草編制了《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》。日前，該標準已經編制完成，如今正面向社會征求意見。意見征求時間截止至2020年6月8日。
閱讀標準征求意見稿后可知，《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》引用了GB/T6682《分析實驗室用水規格和實驗方法》，規定了基于免疫印跡法的肌動蛋白抗體表現分子量測定、效價驗證、物種反應以及穩定性試驗。
據悉，免疫印跡法原理是SDS與蛋白質分子結合形成帶負電荷的蛋白質SDS復合物。在電場的作用下，蛋白質SDS復合物向帶有異向電荷的電極移動。根據聚丙烯酸胺凝膠分子篩效應，復合物遷移速度與其分子量成負相關。將電泳分離的組分轉移并固定在化學合成膜等固相載體后，以特定的免疫反應以及顯色系統分析印跡。
免疫印跡法需要的儀器設備有電子天平、垂直凝膠系統、轉移系統、電泳儀、離心機、均質器、硝酸纖維膜、旋渦振蕩器、掃描儀和離心管。該方法的步驟如下：稱取1mg蛋白粉末加入1mL蒸餾水中溶解，使母液濃度為1mg/mL；將長滿CHO細胞的培養瓶放置在冰上，用吸液管吸出培養液，加入足夠的冷的PBS在培養瓶中充分洗滌細胞表面；向培養瓶中加入冷的NP-40裂解液，然后用細胞刮子沿著瓶壁開始刮細胞；重復第一個步驟以盡可能多的收集到細胞裂解液到離心管中；取出少量細胞裂解液測定蛋白濃度分裝保存在-70℃；電泳至溴酚藍到達分離膠底部；最后對其進行印跡、免疫反應。
我國現行的法規和標準中，沒有關于肌動蛋白抗體測定免疫印跡法的標準，而本標準填補了肌動蛋白抗體測定免疫印跡法檢測指導文件、技術操作細節的缺失，相信本標準能對肌動蛋白抗體測定免疫印跡法檢測提供更為準確、快速、規范的法則以提高檢測工作效率和降低檢測成本。
更多詳情請點擊：《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》征求意見稿
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