純化抗原的鑒定方法較多,常用的有聚丙烯酰胺凝膠電泳法、結晶法、免疫電泳法、免疫雙擴散法等。事實上,僅用一種方法還無法作純度鑒定,只有幾種方法聯合應用才較可靠。結晶法不是純度的標準,因結晶中往往含有其它成分。電泳譜中呈現單一區帶也不能排除在這條帶中含有其他成分。有時雖出現幾條帶,也可能是同一物質的聚合體或降解物。為獲得好的免疫效果,抗原純化后應進行鑒定才能用于動物免疫,抗原的鑒定主要包括以下幾個方面:
1、含量檢測
蛋白含量的測定zui準確的方法是凱氏定氮法,但由于要求有精密設備,故不適合一般實驗室。一般實驗室均采用分光光度計測量法。該法首先測定280nm和260nm的吸光度(A),再用經驗公式計算蛋白含量。
蛋白含量(mg/ml)=A280×1.45-A260×0.74。
另外蛋白含量也可采用福林酚法,具體操作見臨床生化技術。
2、分子量的鑒定
測定分子量一般采用SDS-PAGE電泳法,詳見臨床生化技術。
3、純度鑒定
常采用區帶電泳法鑒定,詳見臨床生化技術。
4、免疫活性鑒定
常采用雙向瓊脂擴散試驗。
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