產品名稱：蛋白激酶B免疫組化試劑盒

保存條件：不使用時取試劑盒中一抗保存-20℃(避免反復凍融)，其他均保存 2-8 ℃

試劑盒特點：該試劑盒具有靈敏度高，特異性強、背景清晰、成本低廉等特點，是理想的免疫組化染色試劑盒。適用于冷凍切片、石蠟切片及固定的細胞涂片，可用于檢測細胞、組織內的特異性抗原。

溫馨提示：本檢測試劑盒適用于人、大小鼠，狗等絕大多數組織，但對于內源性生物素含量比較豐富的組織（如腎臟、肝臟等），應選用非生物素檢測系統，或用avdin 封閉。

試劑盒所含試劑：

1、貨號：YS-0128R ，Rab a AKT，50ul（應用：IHC-P及IHC-F=1:100-500 ）

2、貨號：SP-0023 ，3% H2O2去離子水（無色）6ml（內源性過氧化物酶阻斷劑）

3、貨號：SP-0023-A，Blocking Solution（藍色）6ml（封閉用正常山羊血清工作液）

4、貨號：SP-0023-B Go Anti-Rb IgG/Bio（黃色）6ml（二抗工作液生物素標記羊抗兔IgG）

5、貨號：SP-0023-C，Streptavidin/HRP （紅色）6ml（辣根酶標記鏈酶卵白素工作液）

6、貨號：C02-04001，DAB顯色液 B液（20×） 20ml

7、貨號：C02-04002，DAB 顯色液 A液（20×） 1ml

8、貨號：C01-04001 ，抗體稀釋液 30ml

用戶自備試劑（用戶自行購買，亦可咨詢我公司客服購買）：

一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)緩沖液：

PBS（phosphate buffered solution）即磷酸鹽緩沖液，能夠提供相對穩定的離子環境和pH緩沖能力，是生物學中經常使用的緩沖鹽溶液，用于分子克隆及細胞培養等，pH為7.2-7.4，與人體血液等滲，主要成分為磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉以。

二、檸檬酸鈉抗原修復液：

可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復。可以有效去除醛類固定試劑導致的蛋白之間的交聯，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

抗原修復方法：

方法1：沸水浴修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于沸水浴環境，保持外部沸騰狀態15min，自然冷卻至室溫。

方法2：微波修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷卻至室溫。

方法3：高壓修復，將盛有修復液和玻片的燒杯置于高壓鍋，上汽后修復2-5min，然后將高壓鍋置入涼水中，減壓至正常后取出玻片

抗原修復注意事項：

1）脫蠟水化的切片，應避免因切片干燥，而至非特異性染色。

2）熱修復操作時務必謹慎，當心燙傷。

3）熱修復時間過長易導致脫片，請注意控制時間。

三、DAB（二氨基聯苯胺）染色液：

過氧化物酶將使底物發生反應，于反應部位產生棕色沉淀物。標本顯色時間一般為室溫 5~20分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色況，顯色充分后應將標本及時脫水封固。

實驗前準備：

一）一抗稀釋的準備：

本試劑盒中一抗稀釋液適用于免疫組織化學與免疫印跡等實驗一抗的稀釋，產品添加了抗體保護劑、穩定劑等成分，有效增加了稀釋后一抗的穩定性，減少抗體非特異性吸附。

使用說明：按照抗體推薦效價（或個人優化條件），將適量抗體加入抗體稀釋液即可。例如，效價為1：100時，可將10ul抗體加入到1ml抗體稀釋液中，充分混勻后即可使用。抗體現用現稀釋，稀釋后的抗體2-8℃可以短期保存，但抗體的效價會隨時間而降低。。

二）DAB顯色液的制備實驗準備：在1毫升顯色液B液（DAB 底物液）中，加入1滴（約50微升）顯色液A液（DAB濃縮液），混合均勻，即配成DAB工作液。此溶液必須現用現配，配好后避光保存，6小時內使用，剩余的液體應棄去。標本顯色時間一般為室溫 5~20分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色的情況，顯色充分后應將標本及時脫水封固。

實驗步驟（建議方案）：

1、石蠟切片，常規脫蠟至水

2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復，在此步驟后進行）。

3、3%雙氧水（H2O2）去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內源性過氧物酶活性。

4、滴加試劑A（藍色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

5、滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。

6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）

12、自來水充分沖洗。

13、如果需要，可進行復染，脫水，透明。

14、選擇適當的封片劑封片。