瘦肉精:一類動物用藥的統稱,任何能夠促進瘦肉生長、抑制動物脂肪生長的物質都可以叫做“瘦肉精”。 目前,能夠實現這種功能的物質是一類叫做β-受體激動劑的藥物,將其混入豬飼料進行飼養,能促進豬的生長速度、提高瘦肉率,同時使肉色鮮紅,賣相更好。與傳統瘦肉精yan酸克倫特羅同屬“腎上腺受體激動劑”的萊克多巴胺等同類藥物同樣也能提高豬的瘦肉率。
yan酸克倫特羅的檢測方法主要有酶聯免疫吸附法(ELISA)、膠體金免疫層析法、高效液相色譜法、氣質聯用法及液質聯用法。國家標準GB/T5009.192-2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定中規定方法為氣相色譜-質譜法(GC-MS)、高效液相色譜法、酶聯免疫法,其方法檢出限均為0.5μg/kg。SN/T 1924—2007 進出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法采用LC-MS-MS法,該方法因具有高靈敏度等優點被普遍使用。本文使用UPLC/Xevo TQ-S對豬尿液中的21種β-受體激動劑進行了分析。
QUANPEDIA是沃特世特有的一種可擴展和可搜索的數據庫,提供LC-MS-MS定量方法信息,目前數據庫已有超過1200種化合物,包括色譜方法、質譜方法、定量方法等,可以自由選擇其中的任意化合物或化合物種類自動形成所需的方法,不需要再進行手動方法開發過程。
樣品制備:
樣品制備參照GB/T 22286-2008《動源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定》進行。
1.量取2.0 mL豬尿液樣品,加入8 mL 0.2M的pH 5.2的乙酸鈉緩沖液,充分混勻。
2.加入50 Lβ-Glucuronidase/aryl sulfatase混勻,于37 °C水浴水解過夜。
3.水解液振蕩15min,在5000r/min條件下離心分離10min后,取4mL上清液中添加100 μL 10 ng/mL的內標溶液混勻, 加入5 mL 0.1M高氯酸混合均勻,并調節溶液pH值到1±0.3。以5000 r/mim條件下離心分離10 min后,移取上清液并用10M的氫氧化鈉溶液調節pH值到11。
4.加入10 mL飽和氯化鈉溶液和10 mL異丙醇-乙酸乙酯(6:4)混合溶液,離心分離后取有機相,在40℃水浴下用氮氣將其吹干。
5.提取殘渣中加入5mL 0.2M乙酸鈉緩沖液(pH 5.2),超聲混勻溶解殘渣。
6.樣品凈化(如下圖所示),使用Oasis MCX(3cc/60mg)小柱。
7.凈化后的洗脫液用氮氣吹干,用流動相溶解定容至1.0mL,過0.22μm濾膜,待進樣分析。
固相提取凈化過程Oasis MCX(3 cc/60mg):
結果與討論:
本方法采用一次進樣同時監測豬尿液樣品中的21種β-受體激動劑進行檢測,在靈敏度、分離度等方面均獲得滿意的結果。
與常規串聯四極桿質譜儀不同的是,Xevo TQ-S在提供好的定量數據的同時,還可以提供高質量的光譜MS/MS信息。對豬尿液中含0.5ng/mL的受體激動劑樣品,啟用PICs(子離子確認掃描)功能,可在不影響MRM定量的同時得到各化合物子離子掃描圖,與標樣子離子圖進行匹配,對樣品中陽性結果定性起到幫助判斷的作用。
結論:
本方法采用多離子反應監測(MRM)方式對21種β-受體激動劑進行檢測,具有快速、準確、靈敏度高、分析周期短、適用范圍廣等優點,適用于各類動物組織或動物源性食品等的測定。
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