核苷酸是構成核酸的成分,堿基與糖通過糖苷鍵連成核苷,核苷與磷酸以酯鍵連成核苷酸。目前嬰幼兒配方奶粉中作為添加劑的核苷酸主要有5中:胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、次黃嘌呤核苷酸(IMP)、鳥嘌呤核苷酸(GMP)。其主要生理功能是廣泛參與人體的能量代謝、蛋白質合成,具有提高各種酶的活性、活化細胞功能、促進抗體形成、增強免疫功能的作用。它們可促進神經細胞的生長發育,是與“神經生長因子”有關或者可以作為神經生長物質利用的營養成分。一些臨床上的研究發現,添加核苷酸的嬰兒配方奶粉可減少腹瀉的發生及促進較小胎兒的生長發育。
牛奶中一般不含有核苷酸,但由于核苷酸對嬰幼兒的特殊功效,許多奶制品企業都把核苷酸作為重要添加劑。但人體對核苷酸的需求有一定的限度,并非越多越好。為此對嬰幼兒奶粉產品中核苷酸的質量監控極為重要,必須盡快研究制定適用于乳制品的檢測方法。目前報道的檢測方法主要有比色法、離子交換色譜法、毛細管電泳法、液相色譜法、液相色譜-質譜聯用法等。比色法應用較早,但需要排除干擾、操作繁瑣。離子交換色譜法、毛細管電泳法測定結果重現性不佳。液相色譜多用離子對反相色譜法進行測定,但離子對反相色譜法對胞嘧啶核苷的保留很弱,且牛奶樣品成分復雜,測試過程中容易產生假陽性;液相色譜-質譜聯用法的儀器價格昂貴。
離子色譜法是分析無機陰、陽離子的高效分離測試技術,可以同時將常見陰離子、有機酸進行分離,具有簡單、快速、靈敏度高等特點。而核苷酸在水溶液中離解為離子態,因此可以采用IC進行測定。近年來,采用IC分析生物分子的應用研究漸有報道,但涉及嬰兒奶粉中5種核苷酸的研究還未見報道。為此,本文建立了運用IC同時測定嬰兒奶粉中5中核苷酸的方法。
儀器準備
儀器簡介
IC-700型離子色譜儀采用與WATERS液相相同的并聯泵輸液方式,工作耐壓值高,脈動小、穩定可靠。進樣器與整機分體式模式,具有良好的抗干擾性和可拓展性。接頭、流路均使用進口Peek材料,耐強酸強堿。連續自動再生電化學抑制器,抑制容量高。高分辨率觸摸屏配有WinCE操作系統,以及全中/英文顯示的數據處理系統。
樣品處理:
準確稱取奶粉樣品4.0g,加入20mL水(水溫75℃),振蕩超聲使其溶解均勻,放冷,加入3.0mL5%(體積分數,下同)乙酸,混勻,沉淀蛋白質;加水定容至50mL,離心,取上清液、經反相C18預處理小柱與0.22μm濾膜過濾后,濾液供IC分析。
色譜條件:
色譜柱 | IonPac AG16保護柱,IonPac AS16分離柱 |
流動相 | KOH溶液,梯度淋洗,梯度洗脫程序:0-12min,12mmol/L;12-22min,由12mmol/L線性增加至55mmol/L;22-28min,55mmol/L;28-28.10min,由55mmol/L線性降低至12mmol/L;28.1-33min,12mmol/L,恢復至平衡狀態,流速1.0ml/min |
檢測波長 | 260nm |
柱溫 | 25℃ |
進樣量 | 25μl |
測定結果
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