日前,一個名古屋大學研究小組現已發展了測量實時DNA擴增的一個新穎的方法,該方法是無標記的,從而避免了與其它操作相關的誤差。研究及其成果發表于《科學報告》中。
聚合酶鏈反應(PCR)是分子生物學擴增DNA片段的簡單和無處不在的方法。該項技術非常重要,不僅用于基礎研究,而且也在診斷,法醫和醫療中應用。定量實時PCR是一個修改后的版本,通過并入熒光標記來累積地測量DNA擴增,而不是在過程結束時進行檢測,如在常規PCR中那樣。因此實時PCR對初始的DNA模板的量敏感,實現定量。然而,目前的技術因序列的錯誤,不準確結合,或熒光探針(雜交)的不平等結合等引進偏差。
一個名古屋大學研究小組現已發展了測量實時DNA擴增的一個新穎的方法,該方法是無標記的,從而避免了與其它操作相關的誤差。研究及其成果發表于《科學報告》中。
現有無標記檢測系統依賴于靶分子的表面固定化,這是昂貴、費力和無效率的。這種新方法也引入互補探針結合的雜交偏差的元件。新的技術檢測穿過微小200納米(0.0002毫米)-寬填充有分析試料的納通道液體的激光束的強度的變化。532納米的激光束由透鏡聚焦,然后衍射通過穿過納米通道由光電二極管檢測到。二氧化硅基片用來制作納米通道,較大的樣品液體和二氧化硅的折射率之間的差,較小的是在衍射光強度的變化,并且反之亦然。
“我們使用這種技術進行了人類乳頭狀瘤病毒和肺結核細菌的第一次無標簽檢測,”第一作者隆夫安井說。“該方法是高度敏感的,并且允許一個寬范圍的初始DNA濃度的定量,從1fM至1pM(1000倍范圍),所以是優于現有的基于熒光的檢測系統。”
“我們的系統在34℃的相對低的溫度下進行且無需熱循環測定DNA擴增”,合著者宣忠梶說。“因為它有可能被構造為單個芯片,并且可以檢測小體積樣品為1微升,它比傳統的探測器少100-1,000倍,它是特別適合于發展作為小型化診斷和微生物的檢測。”
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