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管式離心機用于白介素- 2純化工藝的改進

作者: 2013年07月22日 來源: 瀏覽量:
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摘要:以重組白介素-2(IL-2)發(fā)酵液和菌體破碎收集液為材料,根據(jù)臺式離心機和管式離心機的換算公式,求得了管式離心機的校正參數(shù),并討論處理量對管式離心機的實際利用率和離心沉淀濕重的影響,結(jié)果表明管式
摘要: 以重組白介素- 2(IL- 2)發(fā)酵液和菌體破碎收集液為材料, 根據(jù)臺式離心機和管式離心機的換算公式, 求得了管式離心機的校正參數(shù), 并討論處理量對管式離心機的實際利用率和離心沉淀濕重的影響, 結(jié)果表明管式離心機分離細胞破碎液的最佳處理量為 1L/min, 操作時間只有臺式離心機的 1/20; 分離菌液的最佳處理量為 3L/min, 操作時間只有臺式離心機的 1/18。
  關(guān)鍵詞: 管式離心機; 實際利用率; 處理量
  中圖分類號: TQ051.8+4       文獻標識碼: B   文章編號: 1005- 8265(2006)03- 0034- 03
  1 前言
  重組白介素- 2(IL- 2) 基因工程菌生產(chǎn)工藝中, 發(fā)酵后收集菌體和細胞破碎后收集包含體都是采用臺式離心機 (Bottle centrifuges)[1], 每批次的處理量只有幾升, 每次離心時間為 15~30 min.。由于準備將生產(chǎn)量擴大數(shù)倍, 如繼續(xù)使用原臺式離心機進行分離, 則操作時間將大大延長, 加大了生產(chǎn)成本, 也限制了生產(chǎn)規(guī)模的擴大。與原臺式離心機相比, 管式高速離心機具有連續(xù)操作、方便的優(yōu)點, 故擬采用管式離心機(Tubularcentrifuges)進行離心試驗, 選擇最佳操作條件, 從而縮短生產(chǎn)周期, 降低生產(chǎn)成本。
    2 換算公式和實驗材料及過程
    2.1 換算公式
    由斯托克斯重力沉降速度[2]:
          
          
    式中, Qt 是管式離心機的實際處理能力, ξ是實際處理能力和理論處理能力之間的校正參數(shù), L 是管式離心機轉(zhuǎn)筒長度, rt 是管式離心機內(nèi)徑, ωt 是管式離心機的旋轉(zhuǎn)角速度。
            
     2.2 實驗設備和材料
     大容量冷凍式離心機 LC- 6B 型( 臺式), 高速離心機 CR- 21 型( 臺式), 管式離心機 GQ75 型,蠕動泵ZG60- 600 型, 電子天平。
    實驗材料是本公司重組白介素- 2 基因工程菌按照工藝條件發(fā)酵后的菌液和按照工藝條件對菌體破碎的收集液。
     2.3 實驗過程
     2.3.1 破碎后收集液的離心實驗
     高速離心機的批處理體積 Vb 為 1 L, 轉(zhuǎn)速 Nb 為10 000 r/min, 離心時間 tb 為 15 min, 批輔助時間 tw 為5min, rb1、rb2 分別為 0.138 m 和 0.855 m; 管式離心機的處理體積 Vt 也為 1 L, 轉(zhuǎn)速為 20 000 r/min, 采用蠕動泵控制破碎收集液進入管式離心機的流量 ( 即管式離心機的實際處理量 Q) 為 0.5、 0.7、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0L/min, 將收集得到的沉淀, 用電子天平稱重, 即為包含體濕重(Mi)。
     2.3.2 菌液的離心實驗
     大容量冷凍離心機的批處理體積 Vb 為 6 L, 轉(zhuǎn)速Nb 為 4 200 r/min, 離心時間 tb 為 30 min, 批輔助時間tw 為 6 min, rb1、rb2 分別為 0.254 m 和 0.116 m; 管式離心機的處理體積 Vt 也為 6 L, 轉(zhuǎn)速為 20 000 r/min, 采用蠕動泵控制菌液的進入管式離心機的流量 (即管式離心機的處理量 Q) 為0.5、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 L/min,將不同流量下收集得到的菌體用TE ( 0.05 mol/L 的Tris- HCl, 1 mol/L EDTA, pH8.2) 懸浮洗滌兩次, 離心棄上清, 沉淀用電子天平稱重, 即為菌體濕重(Me)。
     3 結(jié)果與處理
     3.1 破碎后收集液的離心結(jié)果
     3.1.1 處理量對離心結(jié)果的影響
     以處理量 Q 為橫坐標, 不同處理量所得的包含體濕重 Mi 為縱坐標作圖, 結(jié)果見圖 1。
     由圖 1 可見, 在小于 1.0 L/min 范圍內(nèi), 隨處理量逐漸增大, 包含體濕重量幾乎不變, 而隨著處理量超出1.0 L/min 后繼續(xù)增大, 包含體濕重逐漸減少, 這是由于處理量已經(jīng)超出管式離心機的實際處理能力, 導致有部分包含體沒有被徹底分離就流出離心機。因此認為 1.0 L/min 就是管式離心機分離包含體的實際處理能力, 即此時的實際利用率 η為 100%。
                      
     將數(shù)據(jù)代入式(10), 可計算得到管式離心機的校正系數(shù) ξ為 0.78。
   將所得校正系數(shù) ξ值, 代入式(11), 可求得不同處理量下的實際利用率 η, 處理量和 η的關(guān)系見圖 1。由式(10) 和圖 1 可知, 當處理量從 0.5 L/min 線性增大至 1.0 L/min, 實際利用率也相應從 50%線性增大至100%, 故最佳的處理量為 1.0 L/min。
   3.1.2 經(jīng)濟性分析
   將高速離心機的批處理體積(Vb) 和處理時間(tb、tw) 代入式 (7), 可計算得到該離心機的處理量約為0.05 L/min。
   以破碎收集液 8 L 計, 離心機的總離心時間為160 min, 而管式離心機的離心時間只有 8 min, 是前者的 1/20; 二者的功率相當, 故采用管式離心機的能耗只有高速離心機的 1/20。
   3.2 菌液的離心結(jié)果
   3.2.1 處理量對離心結(jié)果的影響
   根據(jù)式(11), 代入已求得的校正系數(shù)值和大容量冷凍離心機數(shù)據(jù), 計算出管式離心機在不同處理量下的實際利用率。以處理量 Q 為橫坐標, 不同處理量所得的菌體濕重 Me 和實際利用率 η為縱坐標作圖, 結(jié)果見圖 2。
                    
     由圖 2 可見, 隨著處理量的逐漸增大, 管式離心機的實際利用率隨之逐漸增大, 而菌體濕重量幾乎不變。由于該設備的限制(設計處理能力為0.3~3.3 L/min), 故確定管式離心機離心菌液的的最佳處理量為 3 L/min。
     3.2.2 經(jīng)濟性分析
    將大容量冷凍式離心機的批處理體積(Vb) 和處理時間(tb、 代入式(7), 可計算得到該離心機的處理量 tw)約為 0.17 L/min。
    以菌液120 L 計, 大容量冷凍式離心機的總離心時間為720 min(12 h), 而管式離心機的離心時間只有 40min,是前者的 1/18; 二者的功率均為1.2 kW, 故采用管式離心機的能耗只有大容量冷凍式離心機的 1/18。
      4 結(jié)論
     GQ75 型管式離心機的校正系數(shù)為 0.78, 用于破碎收集液離心分離 IL- 2 包含體的最佳處理量為 1.0L/min; 在該處理量下, 離心時間和能耗都是 CR- 21 型高速離心機的 1/20。
     GQ75 型管式離心機用于 IL- 2 菌液離心的最佳處理量為 3L/min; 在該處理量下, 離心時間和能耗都是LC- 6B 型大型冷凍離心機的 1/18。
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